Naturalna historia nabytego we Wspólnocie WZW typu C w Stanach Zjednoczonych ad

Wszyscy pacjenci mieli co najmniej 18 lat i wszyscy uzyskali pisemną świadomą zgodę. Kontynuacja
Począwszy od 6 miesięcy po wystąpieniu ostrej choroby, otrzymywaliśmy próbki surowicy od każdego pacjenta co 3 miesiące przez okres do 48 miesięcy w celu pomiaru aminotransferazy alaninowej i aminotransferazy asparaginianowej i identyfikacji serologicznych markerów wirusa zapalenia wątroby typu A i wirusa zapalenia wątroby typu B. Próbki z ostrą fazą i seryjne badania kontrolne poddano retrospektywnie testowi na anty-HCV. Dodatkowa próbka surowicy została pobrana sześć lat po rozpoczęciu choroby w celu zbadania trwałości anty-HCV. Pacjenci byli oceniani przez gastroenterologa, jeśli poziom aminotransferazy alaninowej przekraczał górną granicę normy w każdej próbce uzyskanej sześć miesięcy lub więcej po ostrej chorobie. Ocena kliniczna obejmowała historię, badanie fizykalne, testy laboratoryjne czynności wątroby (tj. Poziom bilirubiny, czas protrombinowy i poziom albuminy) oraz testy wykluczające metaboliczne i immunologiczne przyczyny przewlekłej choroby wątroby (np. Pomiary .1-antytrypsyny, żelazo, ferrytyna w surowicy, ceruloplazmina i przeciwciało przeciwjądrowe). Oceny kliniczne powtarzano raz w roku lub częściej, jeśli wskazano klinicznie.
Gdy poziom aminotransferazy alaninowej przekraczał górną granicę normy w dwóch lub więcej próbkach kontrolnych, pacjent został poproszony o poddanie się przezskórnej biopsji wątroby, za którą uzyskano oddzielną świadomą zgodę. Próbki biopsji zostały sprawdzone przez nas dwóch, którzy nie byli świadomi stanu klinicznego pacjentów. Rozpoznania histologiczne ustalono na podstawie przyjętej klasyfikacji międzynarodowej.13, 14 Przeprowadzono inną biopsję, jeśli wskazano klinicznie dwa do trzech lat po pierwszym.
Testowanie próbek surowicy
Próbki surowicy badano na obecność HBsAg, anty-HBc i przeciwciał przeciwko HBsAg za pomocą dostępnych na rynku testów radioimmunologicznych (Abbott Laboratories, North Chicago, I11.) Oraz przeciwciał IgM anty-HAV i IgM anty-HBc z immunotestami enzymatycznymi (Abbott). Próbki surowicy wstępnie badano na obecność przeciwciał anty-HCV za pomocą testu immunoenzymatycznego pierwszej generacji (Ortho Diagnostic Systems, Raritan, NJ), jak opisano wcześniej.8 Po udostępnieniu testów drugiej generacji na anty-HCV (Abbott HCV EIA 2.0, Abbott) , próbki zostały ponownie przebadane. Próbki reaktywnie reaktywne badano za pomocą dodatkowego systemu immunoblot anty-HCV (MATRIX HCV, Abbott) .15 Testy drugiej generacji dla przeciwciał anty-HCV wykrywają przeciwciała przeciwko antygenowi rdzeniowemu (HC-34) i antygenom niestrukturalnym (c100-3 i HC- 31). MATRIX HCV jest półautomatycznym testem immunoblotowym złożonym z czterech rekombinowanych białek pochodzących z trzech genów HCV: dwóch antygenów c100-3, jednego wyrażanego w drożdżach i drugiego w Escherichia coli oraz antygenów HC-34 i HC-31.
Próbki surowicy od pacjentów zarówno anty-HCV-dodatnich, jak i anty-HCV-ujemnych analizowano pod kątem HCV RNA po amplifikacji z reakcją łańcuchową polimerazy (PCR). PCR przeprowadzono jedynie na próbkach pobranych niezależnie od próbek użytych do testów serologicznych, które rozdzielono i przechowywano w porcjach w temperaturze -20 ° C w ciągu czterech godzin od pobrania. PCR przeprowadzono za pomocą modyfikacji protokołu opisanego przez Beach i in. 16 RNA wyekstrahowano z 200 .l surowicy, a cDNA zsyntetyzowano za pomocą zagnieżdżonych starterów w mieszaninie PCR zawierającej 1,5 mmol chlorku magnezu na litr
[hasła pokrewne: tarczyca u mężczyzn objawy, olx pionki, emanera cena ]